童鞋们在进行电转过程中,会遇到细胞电击后出现的死亡现象,细胞死亡很正常,但是如果死亡率太高,那就比较头疼呢,本文为大家整理了一些小窍门,可以让亲们少走些弯路。
1) 必需基因被干扰与细胞毒性:电转染实验时,如果用于电转染的siRNA直接作用于细胞必需的基因,则可能由于基因的敲降而导致细胞毒性。这时可以设置阴性对照组实验,比较阴性siRNA对照组和被敲降基因组的细胞毒性水平。
2)细胞形态改变与细胞毒性:电转染实验时,支原体污染可改变细胞形态,导致细胞毒性,影响电转染效率。检查细胞是否存在支原体污染。可使用新鲜冷冻的细胞或适当的抗生素清除支原体。
3) 脉冲强度过高和细胞毒性: 电转染实验时,电穿孔的脉冲强度过高可能会导致细胞毒性,这时可以以10 V的梯度降低电压和/或以100μF的梯度降低电容。
4) 电转染时的质粒DNA与细胞毒性: 电转染实验时,如果质粒DNA含有内毒素,则会导致细胞毒性。应使用高纯度、无菌、无内毒素和无污染的DNA进行电穿孔。使用氯化铯梯度或阴离子交换纯化的DNA。
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